افزایش مقاومت سیب زمینی در برابر پدیده شیرین شدن در سرما از طریق (rnai) rna-interference

thesis
abstract

سیب زمینی یکی از محصولات مهم در دنیا است که از نظر میزان تولید در رده چهارم قرار گرفته است. در دمای پایین در انبار نشاسته تجزیه شده و به قندهای ساده گلوکز، فروکتوز و ساکاروز تبدیل می شود این قندها باعث کاهش کیفیت محصول می شوند. برای کاهش تجمع قندها از تکنولوژی rnai جهت خاموش سازی ژن های استارچ فسفوریلاز l و استارچ اسوشییتد r1 دخیل در تجزیه نشاسته در دمای پایین استفاده شد. ابتدا قطعاتی از این ژن ها با استفاده pcr جداسازی شدند. بعد از توالی یابی و تایید توالی قطعات مورد نظر، ساخت سازه rnai با این دو قطعه انجام شد. دو نوع سازه rnai، یکی rnai تک ژن برای ژن استارچ فسفوریلاز l (part-sphl-ir) و دیگری سازه rnai چند ژن برای ژن های استارچ فسفوریلاز l و استارچ اسوشییتد r1 (pbi-sphlsar1-ir) ساخته شد. سازه های rnai ساخته شده به داخل agrobacterium tumefaciens انتقال داده شد. برای تراریختی واریته ها از 60 جداکشت در هر آزمایش استفاده شد. کلا? از واریته های آگریا و مارفونا به ترتیب 21 و 33 شاخساره در محیط شاخه زایی تولید شد و از شاخساره های تولید شده به ترتیب 55/71 و 25/59 درصد در محیط حاوی کانامایسین ریشه دار شدند. برای گزینش لاین های تراریخت حاصل از سازه part-sphl-ir، آزمایشات pcr برای حضور ژن nptii و اینترون pdk صورت گرفت و تمامی لاین های ریشه دار شده برای هر دو مورد مثبت بوده و به ترتیب قطعاتی به طول 612 و 608 جفت باز تکثیر شد. برای گزینش لاین های تراریخت حاصل از سازه pbi-sphlsar1-ir، آزمایشات pcr برای حضور ژن nptii و کاست rnai صورت گرفت. تمامی لاین های ریشه دار شده برای هر دو ژن nptii و کاست rnai مثبت بوده و در الکتروفورز به ترتیب باندهایی به طول786 و514 ایجاد شد. برای بررسی میزان بیان ژن-ها در سطح رونویسی از real time rt-pcr استفاده شد. میزان بیان ژن استارچ فسفوریلاز در لاین های تراریخت مورد بررسی 56/1 الی 54/7 درصد نسبت به گیاه شاهد بود. میزان بیان ژن استارچ اسوشییتد r1 بین 58/9 الی 46/16 درصد بود. آنالیز قندهای احیاءکننده و کل در ریزغده های نگهداری شده در 4 درجه سانتی گراد نشان داد در لاین های تراریخت حاصل از سازه part-sphl-ir کاهش در تجمع قندهای کل تا 38 درصد و کاهش در قندهای احیاءکننده تا 39 درصد اتفاق افتاده است. در لاین های تراریخت حاصل از pbi-sphlsr1-ir به ترتیب 58 و 60 درصد کاهش در تجمع قندهای کل و احیاءکننده رخ داده است. بررسی فسفریلاسیون در لاین های تراریخت حاصل از pbi-sphlsar1-ir نشان داد میزان فسفات متصل به نشاسته تا 67/51 درصد نسبت به گیاه شاهد کاهش یافته است. درحالیکه بررسی محتوای نشاسته در ریزغده های این لاین ها نشان داد که میزان نشاسته تا 97/7 درصد نسبت به ریزغده های گیاه شاهد افزایش می یابد

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

an introduction to rna interference (rnai)

the discovery of rna interference (rnai) in recent years has revolutionized biological and medical research. rnai is the sequence-specific gene silencing triggered by double-stranded rna (dsrna). until a couple of years ago only biologists working with caenorhabditis elegans and plants could use rnai technology to gain insight into gene function……

full text

مکانیسم مقاومت در برابر تجمع ویروس برگ قاشقی سیب زمینی (Potato leafroll virus=PLRV) در سیب زمینی همسانه G8107(1) *

ژن خاموشی پس از ترا نویسی (Post-transcriptional gene silencing =PTGS) به عنوان یک مکانیسم طبیعی که به وسیله آن گیاهان اسیدهای نوکلئیک بیگانه مانند ژنوم ویروس‌ها را شناسایی و تجزیه می‌کنند مطرح است. در این مطالعه فرض شد که در مقاومت سیب زمینی  همسانه G8107(1)  در برابر تجمع PLRV نیز چنین مکانیسمی دخالت دارد. این فرضیه با آزمایش انتقال ویروس از طریق پیوند آزمون شد. در این آزمایش قطعاتی از ساقه‌ها...

full text

RNA Interference (RNAi) Screening in Drosophila

In the last decade, RNA interference (RNAi), a cellular mechanism that uses RNA-guided degradation of messenger RNA transcripts, has had an important impact on identifying and characterizing gene function. First discovered in Caenorhabditis elegans, RNAi can be used to silence the expression of genes through introduction of exogenous double-stranded RNA into cells. In Drosophila, RNAi has been ...

full text

RNA Interference: Systemic RNAi SIDes with Endosomes

Systemic RNAi, the intercellular spreading of RNAi silencing, requires SID-1 and SID-3 to import silencing signals in Caenorhabditis elegans. How are these signals exported? SID-5, an endosome-associated protein, is a candidate for the job.

full text

ارزیابی مقاومت کلون‌های امیدبخش سیب زمینی در برابر ویروس‌های PVX، PVY و PVA در گلخانه

  در این تحقیق مقاومت شانزده کلون امیدبخش سیب‌زمینی نسبت به ویروس‌های PVX ، PVY و PVA در قالب سه آزمایش جداگانه در شرایط گلخانه‌ای مورد ارزیابی قرار گرفت. ابتدا با استفاده از آزمـون DAS-ELISA هر یک از کلون‌ها نسبت به ویروس‌های PVX ، PVY ، PVA ، PVM ، PLRV و PVS مورد بررسی قرار گرفتند و کلون‌هایی که آلودگی به یک یا چند ویروس داشتند با به کارگیری روش الکتروتراپی عاری از ویروس شدند و به صورت تک گر...

full text

Medical applications of RNA interference (RNAi)

During its long and rich history, medical sciences have undergone several changes of paradigms. In this quest to develop more potent drugs, less invasive surgical techniques and more sophisticated diagnostic approaches (among other goals) medicine has contributed decisively to our well being and longevity. Some of these major accomplishments, which altered the course of humanity are: the develo...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تبریز - دانشکده کشاورزی

Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023